單克隆抗體製備技術

服務項目背景

單克隆抗體(ti) （McAb）使用淋巴細胞雜交瘤技術將免疫動物的B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞，通過HAT篩選、ELISA抗體(ti) 檢測、亞(ya) 克隆，選擇出具有分泌抗體(ti) 功能又可無限繁殖的雜交瘤細胞，生產(chan) 單克隆抗體(ti) 。單抗的優(you) 點是特異性、均一性、高效性和無限供應性。在免疫學、醫學、生物學等領域的基礎研究和臨(lin) 床醫學上，包括對疾病(癌症等)的診斷、預防和治療等方麵，均顯示出巨大的生命力。

單抗的最大優(you) 勢是它的特異性、均一性、高效性和無限供應性。在免疫學、醫學、生物學等領域的基礎研究和臨(lin) 床醫學上，包括對疾病(包括癌症)的診斷、預防和治療等方麵，均顯示出巨大的生命力。
 
單克隆抗體(ti) 製備服務為(wei) 客戶提供完善的製備選項，不僅(jin) 為(wei) 您製備單克隆抗體(ti) 株，也可為(wei) 您長期提供大量高純度的抗體(ti) ，方便客戶根據自己的需求選擇最適合的服務生產(chan) 線。本項技術服務主要包括：
- Balb/c純係小鼠免疫；
- 脾細胞與(yu) SP2/0骨髓瘤細胞的融合；
- 抗體(ti) 產(chan) 生細胞的ELISA篩選；
- 抗體(ti) 產(chan) 生細胞的亞(ya) 克隆與(yu) 擴增；

- 指定細胞克隆的體(ti) 外培養(yang) 或腹水瘤接種法生產(chan) 單克隆抗體(ti) 。

單克隆抗體技術流程

1、抗原表位設計：使用特有分析軟件，以在線分析方法為(wei) 輔助，綜合蛋白三維結構、活性位點、親(qin) 水性等因素，多參數預測抗原表位，大大提高了抗原表位的可靠性，為(wei) 後續的抗體(ti) 製備提供了有力保證。
2、 多肽合成，包括：標準肽合成、肽修飾、不同純度多肽處理、抗原多肽及其與(yu) 蛋白的交聯等。
3、  重組蛋白抗原製備

（1）重組質粒構建
（2）質粒轉化
（3）誘導表達
（4）蛋白純化
（5）蛋白鑒定

所得到的重組蛋白，具有較高的純度和活性，可用於(yu) 免疫動物以獲得單克隆抗體(ti) 。
4、 雜交瘤製備

（1）免疫動物：免疫動物的選擇根據骨髓瘤細胞株的來源而定，國內目前常用的骨髓瘤細胞均來自Balb/c小鼠。免疫原可為：可 溶性抗原、顆粒性（細胞）抗原。
（2）骨髓瘤細胞的培養。
（3）飼養細胞的製備。
（4）細胞融合。
（5）HAT篩選。

5、 篩選分泌抗體(ti) 的雜交瘤細胞 
一般常用的有：免疫熒光、放射免疫（RIA）、組織化學法和酶聯免疫分析（ELISA）法等，以ELISA方法最為(wei) 常用。
6、 雜交瘤細胞的克隆化培養(yang)
經檢測的雜交細胞雖然分泌抗體(ti) ，但它可能是一個(ge) 雜交細胞，也可能是多個(ge) 雜交細胞的後代所分泌的抗體(ti) ，因此必須進行克隆化培養(yang) ，以獲得得一個(ge) 既有克隆原性又分泌抗體(ti) 的雜交瘤細胞株。
7、 單克隆抗體(ti) 的大量製備
雜交瘤細胞建成之後，需要製備大量抗體(ti) 以備使用。把雜交瘤細胞接種到小鼠腹腔內(nei) ，在雜交瘤生長的同時滲出大量腹水，腹水含有抗體(ti) ，每毫升可達到毫克水平，是目前廣泛采用的方法。
8、 抗體(ti) 純化
通常講單克隆抗體(ti) 已經是很純的，在實驗研究中可以使用，但由於(yu) 它的來源不同，可能會(hui) 含有培養(yang) 液的成份或鼠腹腔液等無關(guan) 的蛋白質影響純度，因而需用硫酸銨沉 澱法、辛酸-硫酸胺法、DEAE-纖維素法或親(qin) 和層析等方法進行純化。本公司主要采用親(qin) 和層析方法，為(wei) 客戶獲得高純度的單克隆抗體(ti) 。
9、 抗體(ti) 鑒定

雜交瘤細胞建株後，還需對其所分泌的單克隆抗體(ti) 的理化性質及對抗原的特異性等進行鑒定，通常需進行以下工作：抗原本身的IgG亞(ya) 類測定；所抗抗原分子量的測定；Western blot鑒定；ELISA效價(jia) 鑒定等。

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電話：021 58591500

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