美問必答-從經驗出發，為你解答脂質體類藥物生物分析難點？

脂質體(ti) 類藥物，作為(wei) 現代醫學的一大突破，不僅(jin) 能顯著提升藥物的溶解度、穩定性和生物利用度，還能大幅降低對健康組織的毒副作用。從(cong) 腫瘤治療到疫苗輸送，再到基因治療，脂質體(ti) 類藥物的應用前景可謂廣闊無垠。然而，這種創新療法的前沿載體(ti) 也帶來了獨特的挑戰。脂質體(ti) 類藥物的生物分析是一個(ge) 複雜而關(guan) 鍵的過程，涉及結構分析、穩定性研究和藥代動力學等多個(ge) 層麵。如何攻克這些難題？如何在實戰中應對各種挑戰？

雲(yun) 講堂特邀脂質體(ti) 領域的資深科研老師——練賽，憑借豐(feng) 富的經驗和獨到的見解為(wei) 您深度解析脂質體(ti) 類藥物生物分析的實戰難題。

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1 怎麽(me) 在方法開發階段選擇相應的SPE板？

練賽：我們(men) 首先要判斷化合物的極性，對於(yu) 弱酸、弱堿及中性化合物，建議選擇矽膠基質的反向SPE板。適用於(yu) 大多數小分子生物分析，比如Waters的HLB係列和Thermo Fisher的SOLA係列板。

對於(yu) 強酸或強堿化合物，則需要考慮離子交換的SPE板。可以選擇Waters的四合一離子交換開發的板，如適用於(yu) 堿性化合物的Oasis MCX陽離子交換板，適合酸性化合物的MAX陰離子交換板，適合強堿性或季銨類化合物的WCX弱陽離子交換板，以及適合強酸化合物的WAX弱陰離子交換板。

此外，選擇合適規格的板子也很重要，可以根據樣品的載量（如2毫克、10毫克或30毫克）進行選擇。

2 為(wei) 什麽(me) 在SPE活化和平衡階段，使用葡萄糖注射液、血漿進行活化和平衡操作。是基於(yu) 什麽(me) 樣的考慮？

練賽：在測定遊離長春瑞濱的包封率時，我們(men) 發現測得的結果始終低於(yu) 客戶提供的值。這可能表明中間處理過程存在脂質體(ti) 破碎或有蛋白質結合部分未能完全被淋洗出去的情況。因此，我們(men) 首先考慮處理可能的脂質體(ti) 破碎問題，在上樣操作之前額外添加葡萄糖進行預處理。

另一方麵，如果固定相上矽膠基團與(yu) 蛋白結合的部分沒有完全洗脫，我們(men) 就考慮到用空白基質，進行預先占位，讓後續蛋白結合的部分沒有辦法結合再固定相上。

3 為(wei) 什麽(me) 總的藥物方法學驗證和遊離藥物方法學驗證標曲和質控的配製有那麽(me) 多不同？

練賽：我們(men) 所有的樣品都來自同一動物體(ti) ，無論是總藥物濃度還是遊離藥物濃度的測定，都基於(yu) 同一樣品。在測定總藥物濃度時，樣品中通常是存在脂質體(ti) 。如果脂質體(ti) 沒有完全破碎的情況下，那麽(me) 測定出的總藥物濃度可能不準確。為(wei) 了模擬樣品中脂質體(ti) 的真實情況，我們(men) 使用含有脂質體(ti) 的質控樣品來校正。隻有當標準品和樣品中的脂質體(ti) 能夠完全匹配時，才能準確反映出總的藥物濃度是否完全破碎。

對於(yu) 遊離藥物的測定，我們(men) 通過減去含脂質體(ti) 的測定結果得出。然而，在最終的樣品中，遊離藥物與(yu) 脂質體(ti) 同時存在，因此我們(men) 需要考慮脂質體(ti) 的破碎和遊離小分子的穩定性。為(wei) 了模擬真實樣品中的情況，我們(men) 需要引入同時含有脂質體(ti) 和遊離小分子的質控樣品進行研究。

4 小鼠組織的檢測 也是測總藥和遊離部分嗎？

練賽：根據脂質體(ti) 的指導原則，是建議說需要測總藥和遊離的，但是組織需要勻漿處理，往往是做不了遊離測定，所以目前還是檢測總藥。

5 請問膠束注射液藥物和脂質體(ti) 藥物一樣需要同時測定總藥和遊離藥物嗎？可以同等方麵去考慮嗎？有沒有什麽(me) 不同呢？

練賽：膠束注射液和脂質體(ti) 注射液等納米藥物在體(ti) 內(nei) 血漿藥物濃度測定方麵，是需要同等考慮的，都需要測定遊離和總藥物濃度。詳見納米藥物非臨(lin) 床藥代動力學研究技術指導原則。目前必威betway网址兩(liang) 個(ge) 膠束注射液的項目經驗，在遊離和總藥物濃度測定方法都是一樣的，不同的就是前處理的分離手段。

6 添加保護劑葡萄糖的濃度和比例是如何優(you) 化並確定下來的?

練賽：通常選擇是5%的葡萄糖，比例是按1:10去添加。如果保護程度不夠，相應濃度可以提高，但是添加比例一般不要小於(yu) 1:10。

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